|
Сокращения: ВГНКИ — Всесоюзный государственный научный контрольный институт, ВЭН — вирусный энтерит норок, ЖКТ — желудочно-кишечный тракт, ИФА — иммуноферментный анализ, МФА — метод флуоресцирующих антител, ПЛК — панлейкопения кошек, РГА — реакция гемагглютинации, РН — реакция нейтрализации, РТГА — реакция торможения гемагглютинации, ЦПД — цитопатическое действие
Впервые ВЭН был зарегистрирован в 1947 г. на звероводческих фермах Канады (провинция Онтарио) [36]. При этом наблюдали устойчивость к болезни платиновых норок: у них смертность не превышала 10 %, в то время как у стандартных достигала 50 %. Были отмечены высокая контагиозность болезни и длительное сохранение вируса во внешней среде. Распространению инфекции способствовало наличие возбудителя в высоких титрах в кале, моче, выделениях из носа, слюне больных животных. Норки выделяли вирус в течение нескольких месяцев после выздоровления. Заключение о вирусоносительстве было сделано на основании того, что в следующем году у молодняка вновь возникло заболевание.
В США болезнь появилась в 1955 г. [20], в Европе ее установили сначала в Дании (1958), а через 4 года в Финляндии, Норвегии, Польше [24, 27]. В последующие годы ВЭН появился во многих странах.
В нашей стране инфекция зарегистрирована в 1965 г. в зверохозяйствах Сахалинской области [11]. Автору принадлежат первые работы по выделению вируса и изучению его вирулентных свойств. Вирусная этиология появившейся инфекции была подтверждена и другими исследователями [2, 7]. Из-за отсутствия специфической профилактики заболевание приносило большой экономический ущерб звероводству.
Возбудитель
Возбудитель ВЭН — ДНК-содержащий вирус, представитель семейства парвовирусы (Parvoviridae). Вирион икосаэдрической формы, диаметром 20+2 нм, лишенный наружной оболочки [13, 23].
Вирус устойчив к физико-химическим факторам: сохраняет инфекционную активность под воздействием эфира, хлороформа, трипсина. При 80 °С инактивируется в течение 15 мин, при 56 °С — за 30 мин, при минус 20...40 °С сохраня-ет инфекционную активность в течение 3 лет. Обработка вируса хлороформом не влияет на его гемагглютинирующую активность. Возбудитель чувствителен к формалину: 0,2%-й раствор при комнатной температуре вызывает его полную инактивацию за 24 ч. Эффективные дезинфицирующие средства — 30%-й раствор кальцинированной соды, жавелевая вода. Гемагглютинирующая активность возбудителя выявлена с эритроцитами свиньи, обезьяны макаки-резусы. Оптимальные условия при постановке РГА или РТГА —забуференный раствор рН 6,4...6,6; температура 4 °С [1, 12].
У возбудителя ВЭН обнаружено (с помощью РН и РТГА, моноклональных антител) антигенное родство с вирусом ПЛК и парвовирусом собак типа 2. При внутримышечном введении норкам возбудителя ВЭН образуются вируснейтрализующие и ингибирующие гемагглютинацию антитела. Последние появляются на 4...5-е сут после инфицирования. Серологический ответ используют при серологической диагностике болезни [6]. Сыворотки исследуют дважды с интервалом 2 нед.
Характерная особенность парвовирусов — размножение в активно делящихся клетках. Поэтому используют первично-трипсинизированную культуру клеток почки котенка или перевиваемую линию клеток этой же культуры (CRFK). Некоторые исследователи считают, что перевиваемая линия наиболее чувствительна к вирусу. При размножении вируса образуются внутриядерные включения и слабовыраженное ЦПД: наблюдают шероховатость, утончение и образование комков в монослое. Подобная картина развивается при старении культуры клеток. Такое ЦПД нельзя учитывать, т.к. отсутствует дегенерация клеточного монослоя. При оценке ЦПД применяют косвенные методы — РГА, ИФА, МФА [6, 14].
Эпизоотология
К ВЭН восприимчивы норки всех возрастов, однако болезнь появляется после отсадки щенков и перехода их на само-стоятельное кормление [26]. Заболевание протекает в острой форме. Смертность щенков колеблется от 10 до 80 % [31,32,36].
Основным источником заражения служат больные животные. Инфицирование происходит алиментарным путем. В 1980 г. во Франции было установлено спонтанное заболевание собак ВЭН после поедания внутренних органов норок, за-раженных вирусом энтерита [29]. Механическими переносчиками возбудителя служат птицы, мухи [19], собаки, кошки, мыши, крысы. Вирус может распространяться с предметами ухода за зверями, а также с транспортными средствами.
Опубликовано много сообщений о чувствительности различных животных к ВЭН. При заражении подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно 1...2-месячных котят инкубационный период продолжался 5...9 дней, клинические признаки включали в себя анорексию, диарею, рвоту. Животные погибали через 5...10 дней после инфицирования [11]. Положительные результаты получены и при введении изолятов вируса энтерита взрослым кошкам [17, 22], что вызывало у последних лейкопению и рвоту. Вирус выделялся с калом. Хорьки, белые мыши, крысы, хомяки как после обработки иммуннодепрессантами так и без таковой были устойчивы к пероральному, подкожному, внутримышечному заражению [10]. Лошади, тхорзофретки, кролики, морские свинки, куриные эмбрионы, которым вводили возбудителя ВЭН различ-ными методами и в разных дозах, не заболевали [9].
Клинические признаки
Заболевание протекает остро. Инкубационный период при естественном инфицировании длится 5...7 сут [7, 32], при экспериментальном — 2...7 сут [31]. Начало болезни характеризуется отсутствием аппетита, угнетением, малоподвижно-стью животного. На 6-е сут появляется диарея, у некоторых рвота. Наиболее характерный признак — изменение цвета и консистенции кала, который становится слизисто-водянистым, серого, желтовато-серого, зеленоватого цвета, иногда обнаруживают примесь крови. В жидких каловых массах находят характерные для этой болезни слизистые «трубки» ма-тово-розового, кремового и реже зеленого цвета, которые состоят из десквамированных клеток покровного эпителия ки-шечника, фибрина и слизи [7, 11, 16]. Температура тела повышается на 0,5... 1 °С. Рвотные массы представляют собой желтоватую жидкость с примесью слизи.
Заболевание сопровождается изменением картины крови. Некоторые исследователи отмечают лейкопению. Известно, что в норме у норок содержание лейкоцитов колеблется от 6000 до 13 000/мкл, а уменьшение их количества до 5000 и ниже можно рассматривать как лейкопению. Примерно у 60...80 % больных норок лейкопения развивается на 5...10-й день после начала болезни [34].
Гибель животных зависит от вирулентности вируса, возраста норок и наличия секундарной инфекции [8].
Большинство норок погибает на 2-е сут после возникновения заболевания, другие — после появления клинических признаков [36]. У молодняка летальность достигает 80 %. Высокий процент гибели во многом обусловлен осложнениями, вызванными вторичной микрофлорой, которая очень быстро размножается в ЖКТ, вследствие чего нарушается защитно-барьерная функция слизистой оболочки кишечника и создаются предпосылки для размножения условно-патогенной микрофлоры.
Патоморфологические изменения
Патоморфологические изменения у норок, павших от вирусного энтерита, зависят от возраста зверей, длительности течения заболевания. У щенков до 2-месячного возраста характерные макроскопические изменения отсутствуют [28]. У норок старшего возраста они постоянные и типичные.
Трупы чаще всего не истощены. Истощение и обезвоживание организма в результате сильной диареи и рвоты отме-чают при длительном течении болезни [24, 30]. У павших норок волосяной покров взъерошенный. Волосы в области ану-са и хвоста склеены и запачканы каловыми массами.
При вскрытии изменения обнаруживают главным образом в ЖКТ. Желудок пуст, в нем содержится небольшое ко-личество слизи и желчи, слизистая оболочка, особенно его привратниковой части резко гиперемирована и нередко изъязвлена. В полости кишечника находится небольшое количество желчи и слизи, нередко с примесью крови. Диаметр кишок увеличен в два-три раза, что обусловлено нарушением эластичности их стенок. Последние утончены и напоминают папиросную бумагу.
Желчный пузырь переполнен желчью.
Мезентериальные лимфатические узлы увеличены, отечны и гиперемированы.
Селезенка обычно увеличена, темно-коричневого цвета, часто с точечными кровоизлияниями под капсулой.
В печени и почках, а также в остальных органах видимых изменений не отмечено [16].
При исследовании гистосрезов слизистой оболочки тонкого отдела кишечника в цилиндрическом эпителии обнару-живают выраженную десквамацию и некроз покровного эпителия [32]. Отдельные клетки эпителия увеличены в два-три раза и находятся в просвете крипт. Такие набухшие клетки получили название «балонирующие». Важный признак — на-личие в ядрах эпителиоцитов эозинофильных телец-включений, их часто обнаруживают на 3-й день после заражения в клетках, выстилающих ворсинки тонких кишок.
Диагностика
Диагностика основана на эпизоотологических данных, клинических признаках, патолого-анатомических изменениях и результатах лабораторных исследований. Предварительный диагноз базируется на клинических симптомах, характерных для ВЭН: наличие слизистых «трубок» в кале, изменение консистенции и цвета кала. Учитывают массовость заболевания, контагиозность и высокий процент гибели молодняка.
Окончательный диагноз может быть поставлен только на основании результатов лабораторных исследований (иденти-фикация возбудителя). Наиболее быстрый и достоверный, не связанный с использованием дорогостоящего оборудования метод — РТГА. Вначале от больных норок берут слизистые «трубки» и исследуют в РГА по общепринятой методике. При обнаружении вирусного антигена ставят РТГА. Обнаруженный антиген идентифицируют с помощью гипериммунной сыворотки, полученной на ВЭН. Учитывая антигенное родство возбудителя ВЭН с парвовирусом собак и возбудителем ПЛК, можно применять сыворотки, полученные на эти вирусы.
При диагностике используют также набор для антигенов парвовирусного энтерита собак, ВЭН и ПЛК. Применяют также РН, однако редко. Материалом для исследований служит кровь от больных норок, которую берут дважды с интер-валом 2 нед.
Наряду с вышеуказанными методами диагностики используют электронную микроскопию.
Дифференциальная диагностика
При дифференциальной диагностике следует исключить алиментарный энтерит и бактериальные инфекции (эшерихиоз, пастереллез, сальмонеллез).
Алиментарный энтерит, вызванный недоброкачественными кормами, несложно установить: достаточно исключить их из рациона. Эшерихиозом болеет в основном молодняк в период отъема от самок. К пастереллезу наиболее восприимчивы молодые норки; фекалии у них становятся жидкими, серо-зеленоватого цвета, с обилием слизи и крови. Болезнь длится до 5...6 сут. При подостром течении сальмонеллеза основным источником заражения служат мясные корма, контаминированные различными сальмонеллами. Наблюдают резко выраженное расстройство ЖКТ, повышение темпера-туры тела до 40...41 °С. Животные быстро и сильно худеют, развивается диарея, иногда появляется рвота. Фекалии становятся жидкими или водянистыми, с примесью большого количества катаральной слизи, иногда крови.
Профилактика
Первое средство профилактики ВЭН было разработано в США (1952). Формолвакцину готовили из паренхиматозных органов (печень, селезенка) норок, павших от вирусного энтерита. Вакцина была недостаточно иммуногенной.
В 1967 г. американский ученый Джонсон сообщил об успешном размножении вируса в культуре клеток почки котенка, а спустя год появилась публикация об изготовлении аттенуированной вакцины на основе вируса, полученного на этой клеточной культуре [23]. Положительные результаты были достигнуты и при создании вакцины против ВЭН в ассоциации с аттенуированным вирусом ПЛК и ботулизма норок. В дальнейшем была разработана инактивированная бивалентная вакцина против ВЭН и ботулизма норок, а также трехвалентная против ВЭН, ботулизма и псевдомоноза норок. В 1981 г. в США была получена трехвалентная вакцина против чумы, ВЭН и ботулизма норок [32]. В этой же стране позже разработали и четырехвалентную вакцину, которая была дополнена пятью инактивированными серотипами псевдомоноза [33, 35].
В нашей стране тканевая моновакцина появилась в 1972 г., ассоциированная (против ВЭН и ботулизма норок), в г. [3, 4]. Культуральная вакцина против ВЭН была создана в 1975 г. [5]. Она сыграла определенную роль в профилактике заболевания, однако имела ряд существенных недостатков. Вирус очищали хлороформом, антибиотиками и центрифугированием, что не позволило получить достаточно очищенный материал. Очевидно, остаточный хлороформ при заражении культуры вызывал дегенерацию монослоя клеток, что было похоже на ЦПД. Известно, что парвовирусы плотоядных не вызывают ЦПД, которое можно обнаружить под световым микроскопом. В результате титр культурального вируса, применяемого при изготовлении вакцины, определяли по несуществующему ЦПД.
Из-за указанных недостатков полученная вакцина оказалась низкоиммуногенной, подтверждением чему служат дан-ные Зверопрома МСХ РСФСР. В 1975 г. падеж норок от инфекционных заболеваний составил 8,3 %, в 1981 - 90 %. В связи со сложившейся ситуацией ВГНКИ ветпрепаратов приступил к исследованиям по усовершенствованию методов изготовления и контроля вакцины против ВЭН. Для очистки вируса был предложен метод стерилизующей ультра-фильтрации, кроме того, разработаны методы получения вирусных сборов с высокими титрами вируса и контроля ин-фекционной активности вируса с помощью РГА.
В 1983 г. все разработки были внесены в инструкцию и ТУ по изготовлению и контролю вакцины против ВЭН [1]. Благодаря улучшенному качеству биопрепарата значительно снизилась гибель норок. По данным Зверопрома, максимальный падеж зарегистрирован в 1982 г.: в 19 зверохозяйствах пало 108 тыс. норок. В 1983 г. наметилась тенденция снижения — погибло 74,5 тыс. животных, а в 1984 г. падеж был минимальным и достиг в 6 зверохозяйствах 12 тыс. норок.
Благодаря созданию высокоиммуногенной вакцины против ВЭН удалось разработать ассоциированные биопрепара-ты. В короткие сроки в ветеринарную практику была внедрена вакцина против ВЭН и ботулизма норок. После выделения от норок нескольких серотипов псевдомоноза предложена вакцина против ВЭН, ботулизма и псевдомоноза норок. И, наконец, была разработана и внедрена в практику четырехвалентная вакцина «Бионор» — против чумы плотоядных, ВЭН, псевдомоноза и ботулизма норок. Вакцина высокоиммуногенна и пользуется большим спросом в звероводстве. За все годы ее изготовления не было получено ни одной рекламации.
В 1997 г. коллективу сотрудников ВГНКИ за разработку специфической профилактики и диагностики инфекционных заболеваний пушных зверей была присуждена премия Правительства РФ.
Литература
1. Гельман Б.Г. Усовершенствование метода изготовления и контроля вакцины против вирусного энтерита норок. Дис. кан.вет.наук. — М., 1985.
2. Данилов Е.П., Демин В.Д. Этиология энтерита норок в зверосовхозах Сахалинской области // Научн. тр. НИИПЗК, 1969; 2: 243—246.
3. Данилов Е.П. Специфическая профилактика вирусного энтерита норок// Научн. тр. НИИПЗК, 1972; 2: 293—297.
4. Данилов Е.П., Дубовая Р.Г. Усовершенствование тканевой формолвакци-ны против вирусного энтерита норок // Научн.тр. НИИПЗК, 1973: 259—263.
5. Данилов Е.П., Кириллов А.Н. Длительность и напряженность иммунитета у норок, вакцинированных против вирусного энтерита // Научн.тр. НИИПЗК, 1977; 16: 11—15.
6. Зепенов Е.Ю., Сулимов А.А., Николаева Н.П. Некоторые биологические и физико-химические свойства вируса энтерита норок. Тезисы конф.: Патология членистоногих и биологические средства борьбы с вредными организмами (секция парвовирусы). — Канев, 1982, 42—49.
7. Кириллов А.К., Егоров А.А. Вирусный энтерит у норок // Ветеринария, 1971; 11: 60—63.
8. Кириллов А.К., Цветкова Е.Т. Секундарная инфекция при вирусном энтерите норок. // Научн. тр. НИИПЗК, 1972; 11: 360—362.
9. Кириллов А.К., Сулимов А.А., Селиванов А.В. Изучение восприимчивости животных к вирусу энтерита норок // Тез. Ill Всесоюзной научной конференции по биологии и патологии пушных зверей. — Петрозаводск, 1981; 2: 284—285.
10. Саутина Ж.Д. Определение восприимчивости новорожденных белых мышей и белых крыс к вирусу энтерита норок, выделенному от больных энтеритом норок // В сб.научн. тр. Ленинградского вет.института., 1975, 40: 113—115.
Сафронская Н.В. Сравнительная оценка методов выделения вируса энтерита норок у котят // Сб.научн. тр. по пушному звероводству и кролиководству, 1967: 49—51.
12. Сулимов А.А., Селиванов А.В., Гельман Б.Г. Изучение гемагглютиниру-ющей активности вируса энтерита норок. // Тезисы докладов Всесоюзной научной конференции «Разработка, апробация и государственный контроль ветеринарных препаратов». — М., 1981.
13. Сулимов А.А. Вирусный энтерит норок. В кн. «Инфекционные болезни животных». — М.: Агропромиздат,1987.
14. Сулимов А.А., Селиванов А.В., Калинина Т.А., Сафонов Г.А. и др. Метка глобулина антисыворотки кролика к вирусу энтерита норок. Биология и патология пушных зверей // Тезисы докл. ко II Всесоюзной научной конференции. — Петрозаводск, 1981.
15. Appeleton G.S. Vaccines for mink virus enteritis. // Nat.Fur.News, 1959; 31 (11,12).
16. Belcher J. Symptom and control of summer disease of mink. The black fox maga modern mink breeder. 1953; 37 (3): 7—8.
17. Belcher J. Virusenteritis of mink. // Furtradei., 1956, 33 (11): 110—111.
18. Belcher S. Summer disease of mink. //Furr trade J. of Canada, 1953; 30(12): 33—34.
19. Boulliant A., Lee V.H., Hanson R.P. Epiizotology of mink enteritis: 2. Musca domestica lasa possible factor of virus. // Canad J. Comp.med.vet. sci., 1965; 29 (6): 148—152.
20. Hartsough G.R., Gorham J.R. Infections enteritis of mink. // Am. Fur breeder, 1955; 28 (4): 10—11.
21. Hartsough G.R., Gorham J.R. Virus enteritis. The blue of fur farmig, 1969, 120—121.
22. Higashihara Т., Izawa H. Mink enteritis in Japan F. 1. Isolation and
characterization of the cansation virus in pathogenety in cat. // J.Vet.Sci., 1981;
43: 841—851.
23. Johson R.H. Feline panleukopenia virus in nitro camparison of strains with a
mink enteritis virus. // J. small anim. pact., 1967: 319—324.
24. Kangas J. Minikkien virusripulin estuntyminen Suomessa. // Eripainos
Suometn Elainlrrkrlchti, 1962; 68: 261—269.
25. Kennedy A.H. Mink virus enteritis. //The mink in health and disease., 1951; 288—291.
26. Knox-Seith B. Virus enteritis. —Oslo: Pelsdyrboren,„1969.
27. Knox B. Virus enteritis hos mink konstateret for forste gang in Denmark. // Med. Lemsble. Danske dyresegeboren, 1958; 41: 727—730.
28. March R.F. An outerbreak of mink virus enteritis in Oregon. // Nat fur news, 1963; 35 (6): 12—20.
29. Moraillon A., Moraillon R., Person J.M. Parvovirose canine: L'ingestion d'organes de vison attaint d'enterite a virus declenche Chez le chien une maladie identicqe a lamaladi spontane. // Rec. med. Vet, 1980; 156;.7(8): 539—548.
30. Pridham T.J. More abort that dreaded disease virus enteritis. // The blach fox mog a modern mink breeder, 1958; 42 (3): 12—13.
31. Russell J.D., Enteritis virus. // Am. Fin. Breeder, 1964, 37 (13): 130—131.
32. Schofield F.W. Virus enteritis in mink. // North americafn veterinarian, 1949; 30 (10): 651—654.
33. Schwartz T. Laboratory and field testing of a singledose vaccine for
protection of mono againc distemper, virus enteritis, botulism and pseudomonos
aeruginose. // 3zd. Int sei congrese, 1984; 57: 1—3.
34. Sieglee G. The parvovirus. — Wien New. lork, 1976.
35. Shen D. Using jet infection to vaccinate mink and ferrets againt canin distemper, mink virus enteritis and botulism type С // Vet. med. Small animal clinician., 1981; 42 (5): 838—840.
36. Wills C.G. Infectionus enteritis of mink. // Fur Trade. J. Canad, 1953; 30 (9): 10—11.
Winans K.E., Marty E.W. New development in production of mink enteritis vaccine. // Us Fur Rancher, 1968; 47 (5): 18—19.
А.А. Сулимов, В.И. Уласов, ФГУ «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (Москва)
|